那些年對于ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的疑惑

更新時間：2021-08-27

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“隔壁的實(shí)驗(yàn)室又發(fā)了3篇SCI文章，我們還在處理數(shù)據(jù)，這幾家的試劑盒檢測數(shù)據(jù)怎么都不一樣？"小編每當(dāng)聽到這句話，每次感受都不同。對那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者、那些把青春獻(xiàn)給實(shí)驗(yàn)室的研究生們表示深深的同情。那么，造成試劑盒檢測數(shù)據(jù)不一樣的原因，除了一些實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)環(huán)境等客觀因素外，還有試劑盒質(zhì)量參數(shù)，如重復(fù)率、板內(nèi)差、板間差、線性稀釋、回收率等。但是，最重要的影響因素可能是作為檢測標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以，下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾個疑惑。

不同的ELISA試劑盒如何進(jìn)行校準(zhǔn)？

國際標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行校準(zhǔn)

目前，ELISA試劑盒校準(zhǔn)方法為應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)品對試劑盒進(jìn)行校準(zhǔn)。

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高質(zhì)量的原料進(jìn)行校準(zhǔn)

ELISA試劑盒的檢測指標(biāo)種類可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于NIBSC/WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)品，有時需要依靠高質(zhì)量的ELISA試劑盒原料。目前，優(yōu)質(zhì)的進(jìn)口原料（如重組蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品）依然是生產(chǎn)高質(zhì)量ELISA試劑盒的前提條件之一，但是不同品牌的蛋白表達(dá)體系和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)不同，可能會導(dǎo)致原料的性能不同，進(jìn)而造成檢測數(shù)據(jù)的差異。

嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳飿颖具M(jìn)行驗(yàn)證

隨著國內(nèi)生物技術(shù)的發(fā)展，自主研發(fā)蛋白表達(dá)、抗體制備、ELISA試劑盒開發(fā)技術(shù)也在不斷進(jìn)步。除了應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)品對試劑盒進(jìn)行校準(zhǔn)外，也可用一些暫無相關(guān)機(jī)構(gòu)認(rèn)可的生物樣本進(jìn)行驗(yàn)證，按照科學(xué)研究方法，對種屬、性別、生命周期階段、種類等因素劃分所得到的生物樣本進(jìn)行驗(yàn)證。

生物樣本驗(yàn)證ELISA試劑盒的試驗(yàn)數(shù)據(jù)

重組蛋白-ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的選擇

目前，國內(nèi)外的雙抗夾心法ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品大多數(shù)屬于重組蛋白，競爭法ELISA標(biāo)準(zhǔn)品更多樣化，有可能為重組蛋白也可能為化學(xué)合成物質(zhì)。為什么天然蛋白不用于作為標(biāo)準(zhǔn)品？雙抗夾心法ELISA試劑盒選擇重組蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品的主要原因：

第一，天然蛋白均存在于復(fù)雜的生物樣本中，大多數(shù)在細(xì)胞或組織中表達(dá)量可能較少，不能進(jìn)行蛋白純化或者成本高昂，無法獲得大量的天然蛋白。

第二，ELISA試劑盒檢測基于抗體和抗原的特異性結(jié)合，在研究之初，通過重組蛋白進(jìn)行免疫特定動物獲得特定的單克隆或者多克隆抗體，因此，抗體和免疫的抗原存在高親和力和高特異性。

第三，隨著蛋白表達(dá)技術(shù)的發(fā)展，重組蛋白和天然蛋白具有更高的相似度，特別是以酵母或細(xì)胞為代表的真核表達(dá)系統(tǒng)的發(fā)展，讓真核表達(dá)的重組蛋白具有更多的空間構(gòu)象和生物活性。

ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品如何使用？

如果ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品是重組蛋白，請?zhí)崆?0-30分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫(18-25℃)，如果試劑盒需分多次使用，請僅取出本次實(shí)驗(yàn)所需的酶標(biāo)板條和試劑，剩余板條和試劑需按照要求條件保存。

標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：將標(biāo)準(zhǔn)品的凍干粉末盡量集中到西林瓶或離心管底部，加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，室溫水平靜置10分鐘，讓重組蛋白恢復(fù)其空間構(gòu)象，然后上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，輕輕混勻，避免起泡，然后進(jìn)行分裝和使用即可。

標(biāo)準(zhǔn)品的保存和棄用：如果1個月內(nèi)使用，ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品可以暫存于4℃；如果1個月以上不用，標(biāo)準(zhǔn)品必須保存于-20℃以下環(huán)境；已配制好的標(biāo)準(zhǔn)品工作液如有剩余液體請切記要棄用，標(biāo)準(zhǔn)品工作液一定要現(xiàn)配現(xiàn)用。

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