FISH技術(shù)在慢性淋巴細(xì)胞性白血病中的應(yīng)用

更新時(shí)間：2013-06-03

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慢性淋巴細(xì)胞性白血?。?/span>chronic Lymphocytic leukemia，CLL）是世界上常見的白血病種類，在中國發(fā)生率較低，僅占慢性白血病的10%。與其他白血病不同，不同CLL患者之間病情差別非常大。因此，對(duì)于CLL患者，如何在病情初期便對(duì)其疾病進(jìn)展情況、治療有效性和生存期進(jìn)行準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)顯得尤為重要。

CLL的臨床分期主要包括Rai或Binet分期法。這些方法依靠體格檢查和常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，雖然也對(duì)患者的生存期做出一定的預(yù)測(cè)，但并不準(zhǔn)確，且無法對(duì)疾病的進(jìn)展、藥物治療的有效性等做出評(píng)估。為了克服這個(gè)缺陷，在常規(guī)臨床分期以外還有多種技術(shù)被采用以彌補(bǔ)其不足.

一：臨床分期方法的局限性

1. 80%患者均處于臨床早期階段

2. 無法預(yù)測(cè)疾病的進(jìn)展情況

3. 無法了解發(fā)病機(jī)制

4. 腫瘤負(fù)荷，如巨型淋巴結(jié)情況未被考慮

5. 無法預(yù)測(cè)資料有效性

二: CLL預(yù)后判斷檢驗(yàn)方法

常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

1. 臨床分析

2.骨髓浸潤程度分級(jí)

3.血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)

4.血淋巴細(xì)胞倍增時(shí)間生物標(biāo)志物檢驗(yàn)

1.細(xì)胞遺傳學(xué)（染色體條帶分析、FISH）

2.免疫球蛋白重鏈變異區(qū)（IgVH）突變

3.血清標(biāo)志物

在諸多新興的檢測(cè)方法中，FISH技術(shù)以其準(zhǔn)確、方便、客觀的優(yōu)勢(shì)得以脫穎而出。

準(zhǔn)確FISH技術(shù)直接檢測(cè)特定基因的變化情況。正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞必然伴隨著內(nèi)部基因的變化。且這種變化往往比相關(guān)蛋白的表達(dá)、臨床癥狀的變化都要早，因此檢測(cè)基因的變化情況能更好地對(duì)疾病進(jìn)展進(jìn)行預(yù)測(cè)。

細(xì)胞中DNA的穩(wěn)定性要遠(yuǎn)高于蛋白質(zhì)，在樣品處理過程中不容易對(duì)DNA造成損傷而影響檢測(cè)結(jié)果，而蛋白質(zhì)的檢測(cè)就比較容易受到外界因素的影響。例如IgVH突變狀態(tài)的主要標(biāo)志物之一CD-38的檢測(cè)就很容易受到時(shí)間因素的影響。

目前已利用了FISH技術(shù)對(duì)CLL患者的預(yù)后進(jìn)行多次回顧性實(shí)驗(yàn)，證明FISH的檢驗(yàn)結(jié)果與患者的疾病進(jìn)展、治療的有效性、生存期長短密切相關(guān)，且與其它檢測(cè)指標(biāo)，如IgVH突變狀態(tài)具有較好的一致性，可作為CLL患者預(yù)后判斷的重要指標(biāo)。

方便在FISH技術(shù)開展以前，主要使用染色體條帶技術(shù)對(duì)染色體變異情況進(jìn)行檢測(cè)。這種方法要求樣本為分裂期細(xì)胞，而慢淋細(xì)胞在體外很難培養(yǎng)進(jìn)入分裂期，只有40%左右的患者能檢測(cè)出染色體異常。FISH技術(shù)對(duì)樣本的要求相對(duì)寬松，可直接對(duì)間期細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，檢出率可達(dá)染色體條帶技術(shù)的兩倍。

FISH技術(shù)目前已經(jīng)有一套相當(dāng)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)流程，一般1-3個(gè)工作日即可提供檢驗(yàn)結(jié)果，比計(jì)算淋巴細(xì)胞倍增時(shí)間或培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行染色體條帶分析大大節(jié)約時(shí)間。且操作難度低，不需要像使用ZAP70檢測(cè)IgVH突變那樣仔細(xì)分離細(xì)胞。

客觀FISH檢測(cè)的結(jié)果以熒光信號(hào)計(jì)數(shù)為基礎(chǔ)，過程相對(duì)客觀，不同實(shí)驗(yàn)者之間的一致性好，且結(jié)果的陰/陽性判斷有固定的標(biāo)準(zhǔn)，便于不同實(shí)驗(yàn)室直接比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果。而染色體條帶技術(shù)則主觀性較強(qiáng)，依賴于實(shí)驗(yàn)者的個(gè)人經(jīng)驗(yàn)；在使用CD-38、ZAP70等替代性標(biāo)志物進(jìn)行IgVH突變狀態(tài)檢測(cè)時(shí)也缺乏統(tǒng)一的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致不同實(shí)驗(yàn)室之間的檢查結(jié)果大相徑庭。

“發(fā)現(xiàn)分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)（FISH）可以檢測(cè)到80%慢性淋巴細(xì)胞性白血病患者的染色體變異，（檢出率）差不多是染色體條帶技術(shù)的兩倍……”——Hartmut Dhoner et al. 新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志

常見生物標(biāo)志物檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)。

三：常見生物標(biāo)志特檢測(cè)方法一覽表

檢測(cè)原理主要檢測(cè)指標(biāo)優(yōu)點(diǎn)局限性

細(xì)胞遺傳學(xué)腫瘤細(xì)胞常伴有不同部位的基因突變，導(dǎo)致染色體某些特定區(qū)域的缺失、易位或擴(kuò)增。13q14.1缺失、12染色體3體、ATM基因缺失、p53基因缺失預(yù)后相關(guān)性好：可從發(fā)病機(jī)制上進(jìn)行研究；提供客觀的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。染色體條帶技術(shù)檢出率低，FLSH技術(shù)有時(shí)無法獲得所需的探針。

lgVHIgVH突變的細(xì)胞可能來源于生發(fā)中心后腫瘤，而未突變的細(xì)胞可能來源于生發(fā)中心腫瘤。IgVH區(qū)基因、CD38、ZAP-70IgVH突變情況可作為患者生存期限預(yù)測(cè)的重要指標(biāo)。PCR檢測(cè)過于昂貴；CD38和ZAP-70不夠穩(wěn)定，且缺乏客觀的陽性判定指標(biāo)。

血清標(biāo)志物腫瘤細(xì)胞在生長過程中常伴有某些蛋白質(zhì)含量的變化。CD23、胸腺嘧啶激酶、β2小球蛋白與疾病的進(jìn)展相關(guān)；和淋巴細(xì)胞倍增時(shí)間β骨髓浸潤實(shí)驗(yàn)具有相關(guān)性。缺乏*的陽性判別標(biāo)準(zhǔn)，缺乏足夠的前瞻性研究證實(shí)其可靠性。

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