發(fā)布時(shí)間:2025/11/14
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描述:細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡,可見于各種器官和細(xì)胞,在正常發(fā)育、生理、病理過(guò)程中對(duì)細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的蛋白酶家族,包含10多個(gè)成員。其中只有Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前體產(chǎn)生活性細(xì)胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產(chǎn)生20kD和10kD片斷,這兩個(gè)片斷可以形成異源二聚體,并進(jìn)一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過(guò)剪切Bcl-XL調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,并通過(guò)對(duì)細(xì)胞因子前體的剪切來(lái)調(diào)控相關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng)。試劑盒測(cè)定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA (Ac-YVAD-pNA),釋放出游離的硝基苯胺pNA,后者呈黃色在405 nm具有最大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測(cè)定。其吸光度值對(duì)應(yīng)于Caspase-1的水解活性。反應(yīng)體系100微升,試劑盒提供的試劑,除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可進(jìn)行50或100次樣品測(cè)定。
適用:測(cè)定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-1活性。
組成與儲(chǔ)存:
1. 裂解緩沖液: 20 ml ,4 oC
2. 反應(yīng)緩沖液: 10 ml ,4 oC
3. 2 mM Ac-YVAD-pNA底物: 0.5 ml,-20 oC避光
4. 10 mM pNA標(biāo)準(zhǔn)品: 0.5 ml,-20 oC避光
以上標(biāo)出的量為100次檢測(cè),50次檢測(cè)的試劑量減半。試劑常溫運(yùn)輸。到達(dá)后按要求儲(chǔ)存,1年內(nèi)穩(wěn)定。
所需儀器:
酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。
工作波長(zhǎng):最大吸收波長(zhǎng)405 nm,如不具備也可在400~450 nm范圍內(nèi)測(cè)定。
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