甘油三酯（TG）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào)：BC0620
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：自備玻璃空瓶，*和異丙醇按體積比1:1混合，蓋緊后混勻，大約需要90mL，現(xiàn)用現(xiàn)配，2-8℃保存；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加5 mL試劑一，即1mg/mL甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，-20℃分裝保存兩周,避免反復(fù)凍融。

技術(shù)指標(biāo)：
檢出限：0.0559 mg/mL
線性范圍：0.0625-1.2 mg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、渦旋振蕩儀、*、異丙醇、蒸餾水和100mL玻璃空瓶。
操作步驟：

• 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清待測。

2. 細(xì)胞、細(xì)菌：先收集500-1000萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（功率200W，超聲2s，停1s），8000g，4℃離心10min，取上清待測。

3. 血清（漿）等液體樣本：直接測定。

二、測定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到420nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 水浴鍋預(yù)熱到65℃。

加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩30s，靜置3-5min后再劇烈震蕩30s，如此反復(fù)3次，常溫靜置一定時(shí)間分層后取上層溶液75μL，置于新的EP管中。
3．甘油三酯含量測定：

取出EP管，待冷卻后，吸取全部反應(yīng)液至玻璃比色皿中，于420nm 處比色，記為A空，A標(biāo)和A測。（空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需檢測1-2次。）
三、TG計(jì)算公式：
1. 血清（漿）中甘油三酯含量：
TG含量（mg/dL）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）×100 =100×（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）  
2. 組織或細(xì)胞、細(xì)菌中甘油三酯含量：
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
TG含量（mg/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）÷（Cpr ×V）
=（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）÷ Cpr
(2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算
TG含量（mg/g質(zhì)量）= C標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）÷W=（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）÷ W
(3) 按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算：

TG含量（mg/10⁴ cell）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）×V÷N
=（A測-A空）÷（A標(biāo)-A空）÷N
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1mg/mL；100：單位換算系數(shù)，1dL=100mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V：加入試劑一的體積，1mL；N：細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量，以萬計(jì)。
注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時(shí)蓋緊。

2. 加試劑二后需反復(fù)劇烈振蕩，使待測液中甘油三酯得到充分提取，振蕩幅度、時(shí)間、反復(fù)次數(shù)以及等待分層時(shí)間均應(yīng)保證一致。

3. 為保證試驗(yàn)的重復(fù)性，每次水浴后的冷卻時(shí)間要統(tǒng)一。

4. 若測定管OD值大于1時(shí)，建議將樣本用試劑一適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測，并在計(jì)算時(shí)需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Wei Hu,Rui Wei,Liyue Wang,et al. Correlations of MMP-1, MMP-3,and MMP-12 with the degree of atherosclerosis, plaque stability and cardiovascular and cerebrovascular events. Experimental and Therapeutic Medicine. 2018;(IF1.448)

2. Jieyong Xing,Yanshao Liu,Tao Chen. Correlations of chemokine CXCL16 and TNF-α with coronary atherosclerotic heart disease. Experimental and Therapeutic Medicine. November 2017;(IF1.448)

3. Zhenbin Xu,Xizhuang Bai. Strontium ranelate-induced anti-adipocytic effects are involved in negative regulation of autophagy in rat bone marrow mesenchymal stem cells. International Orthopaedics. October 2018;(IF2.384)

4. Chu X Y, Yang S Z, Zhu M Q, et al. Isorhapontigenin Improves Diabetes in Mice via Regulating the Activity and Stability of PPARγ in Adipocytes[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2020, 68(13): 3976-3985.

5. Li W, Li Y, Zhao Y, et al. The protective effects of aloperine against ox-LDL-induced endothelial dysfunction and inflammation in HUVECs[J]. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology, 2020, 48(1): 107-115.

參考文獻(xiàn)：

1. Fletcher M J. A colorimetric method for estimating serum triglycerides[J]. Clinica Chimica Acta, 1968, 22(3): 393-397.

2. Hercules D M, Sheehan T L. Chemiluminescent determination of serum glycerol and triglycerides[J]. Analytical chemistry, 1978, 50(1): 22-25.

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