錳過(guò)氧化物酶活性檢測(cè)試劑盒其他系列
儲(chǔ)存條件
2-8℃
有效期
6個(gè)月
單位
盒
英文名稱(chēng)
Manganese peroxidase (Mip) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號(hào)：BC1620

更新時(shí)間：2025-08-26

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問(wèn) 量：1888

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測(cè)試劑盒-常量法

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（GPX4）活性檢測(cè) 總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測(cè) α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測(cè) 硫代葡萄糖苷含量檢測(cè) 生物堿含量檢測(cè) 總氧化狀態(tài)（TOS）檢測(cè) α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測(cè) 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測(cè) 水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測(cè) 植物銨態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測(cè)定系列其它系列信號(hào)系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

錳過(guò)氧化物酶（Mnp）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC1620
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱(chēng)	規(guī)格	保存條件
試劑一	液體80mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體6mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體11mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體200μL×1支	2-8℃保存

溶液配制：
試劑四：臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需量按照試劑四（μL）：蒸餾水（μL）=1:49的比例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說(shuō)明：
錳過(guò)氧化物酶（Mnp）（EC1.11.1.13）是一種普遍存在于細(xì)菌和真菌中的微生物木質(zhì)素分解酶，在微生物木質(zhì)素分解系統(tǒng)中起著關(guān)鍵作用，它可以有效的降解木質(zhì)素以及廢水和土壤中比較難降解的化合物，在生物制漿、生物漂白和污染物的生物降解等工業(yè)領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。
錳過(guò)氧化物酶在Mn²⁺環(huán)境下，可將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，四鄰甲氧基連酚在465nm處有吸收峰，通過(guò)檢測(cè)465nm處吸光值的變化，可測(cè)定錳過(guò)氧化物酶的活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、超聲波細(xì)胞破碎儀、研缽/勻漿器、1mL玻璃比色皿、震蕩儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：

樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、組織：按照樣本質(zhì)量（g）：試劑一體積（mL）為1:5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿；10000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌或細(xì)胞樣本：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500-1000:1 的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率30%或300W，超聲 3s，間隔 7s，總時(shí)間3min），10000g 4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
3、液體樣本：直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。
二、測(cè)定步驟
1、可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至465nm，蒸餾水調(diào)零。

2、測(cè)定前根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量取出部分試劑一、試劑二、試劑三和試劑四置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他動(dòng)物）預(yù)熱10min以上。
3、加樣表（在 1mL玻璃比色皿中依次加入下列試劑)：

試劑名稱(chēng)（μL）	測(cè)定管
樣本（μL）	100
試劑一（μL）	500
試劑二（μL）	100
試劑三（μL）	200
試劑四（μL）	100

將上述試劑分別加入1mL玻璃比色皿后迅速吹打混勻，記錄第30s的吸光值A1以及10min30s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算ΔA =A2-A1。若一次性測(cè)定樣本過(guò)多，可根據(jù)使用量將試劑一、二、三、四按5:1:2:1比例配成工作液后進(jìn)行預(yù)熱，測(cè)定時(shí)按照100μL樣本+900μL工作液加入1mL玻璃比色皿進(jìn)行測(cè)定。
三、Mnp活力的計(jì)算
1.按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
酶活定義：pH4.5條件下，每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
Mnp活性（U /mg prot）= ΔA×V反總÷(?×d)×10⁹÷(V樣×Cpr)÷T=82.64×ΔA÷Cpr
2.按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：pH4.5條件下，每g組織每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
Mnp活性（U /g 質(zhì)量）= ΔA×V反總÷(?×d)×10⁹÷(V樣÷V樣總×W)÷T=82.64×ΔA÷W
3.按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：pH4.5條件下，每10⁴細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
Mnp活性（U /10⁴ cell）= ΔA×V反總÷(?×d)×10⁹÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=82.64×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

按照樣本體積計(jì)算

酶活定義：pH4.5條件下，每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
Mnp 活性（U/mL）=ΔA×V反總÷(?×d)×10⁹÷V樣÷T= 82.64×ΔA
ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100 L/mol/cm；d:比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.001L；V樣：加入樣本體積，0.1mL，V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，10 min；10⁹：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1mol=10⁹nmol。
注意事項(xiàng)：
當(dāng)A1大于1.2或者ΔA大于0.5時(shí)，建議將樣本用試劑一稀釋后測(cè)定；當(dāng)ΔA過(guò)小時(shí)，可以適當(dāng)加大樣本量后重新進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1002g杏鮑菇加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清置冰上，之后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算A1=0.011，A2=0.03，ΔA=A2-A1=0.019，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
Mnp 活性（U/g 質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(?×d)×10⁹÷V樣÷T=15.67U/g 質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

Chowdhary P, Shukla G, Raj G, et al. Microbial manganese peroxidase: a ligninolytic enzyme and its ample opportunities in research[J]. SN Applied Sciences, 2019, 1(1):45.
Rogalski J, Lundell T, Leonowicz A, et al. Production of laccase, lignin peroxidase and manganese-dependent peroxidase by various strains of Trametes versicolor depending on culture conditions[J]. Polish Society of Microbiologists, 1991, 40(3-4):221-234.

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