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產(chǎn)品中心
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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法土壤系列BC3085-100T/48S土壤α-葡萄糖苷酶（S-α-GC）檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)：BC3085-100T/48S
更新時(shí)間：2024-04-11
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問(wèn) 量 ：925
010-50973130
產(chǎn)品分類
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檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC3085
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體0.5mL×1支（自備） | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：自備甲苯，2-8℃保存；
試劑二：臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周；
標(biāo)準(zhǔn)品：5 mmol/L的對(duì)硝 基苯* 溶液。
產(chǎn)品說(shuō)明：
S-α-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間的糖苷鍵生成葡萄糖，是纖維素分解酶系中重要組成成分之一，在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
S-α-GC能夠催化對(duì)-硝 基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對(duì)-硝 基苯*，后者在400nm有特征光吸收。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。
二、測(cè)定步驟
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)品：取20μL 5mmol/L的對(duì)硝基 苯 * 溶液，加入980μL蒸餾水，充分混勻，配制成100μmol/L標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要100μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）
加樣表：
| 試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
| 風(fēng)干土樣（g） | 0.02 | 0.02 | - | - |
| 試劑一（μL） | 5 | 5 | - | - |
| 振蕩混勻，使土樣潤(rùn)濕，室溫放置15min | - | - | ||
| 試劑二（μL） | 80 | - | - | - |
| 試劑三（μL） | 100 | 100 | - | - |
| 混勻， 37℃水浴1h 后，立即沸水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水/冰浴冷卻。 | - | - | ||
| 試劑二（μL） | - | 80 | - | - |
| 10000rpm 25℃離心10min，取上清液 | - | - | ||
| 上清液（μL） | 100 | 100 | - | - |
| 標(biāo)準(zhǔn)品（μL） | - | - | 100 | - |
| 蒸餾水（μL） | - | - | 100 | |
| 試劑四（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
充分混勻，常溫靜置2min 后，測(cè)定吸光值A，分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做1-2次
三、S-α-GC 活力計(jì)算
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對(duì)-硝 基苯*定義為一個(gè)酶活力單位。
S-α-GC活力（U/g 土樣）=ΔA÷ (ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V反總÷W÷T=0.444×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V反總：反應(yīng)體系總體積：1.85×10-4L；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，100μmol/L；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
若ΔA<0.01，可延長(zhǎng)37℃水浴時(shí)間；若ΔA>1.5，可將上清液稀釋后進(jìn)行測(cè)定；最后計(jì)算時(shí)注意各個(gè)因素的改變。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取兩管0.02g三葉草土，即為測(cè)定管和對(duì)照管，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.421-0.238=0.183，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.473-0.047=0.426，計(jì)算酶活得：
S-α-GC活力（U/g 土樣）=0.444×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.444×0.183÷ 0.426÷0.02=9.5366 U/g 土樣。
取兩管0.02g林土樣，即為測(cè)定管和對(duì)照管，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.374-0.225=0.149，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.473-0.047=0.426，計(jì)算酶活得：
S-α-GC活力（U/g 土樣）=0.444×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.444×0.149÷ 0.426÷0.02=7.7648 U/g 土樣。
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