北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC4370-50T/24S
更新時(shí)間：2024-04-16
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1227
010-50973130
產(chǎn)品分類
植物中酰脲含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC4370
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液A液 | 液體30 mL×1瓶（自備） | 常溫保存 |
提取液B液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
試劑六 | 液體50 mL×1瓶（自備） | 常溫保存 |
試劑七 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液A液：自備無水乙醇；
2、試劑五：臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水溶解備用，可分裝后-20℃保存，-20℃保存一周；
3、試劑六：自備濃鹽酸；
4、標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg尿*素。臨用前加入632.5 μL蒸餾水配制成100 μmol/mL酰脲標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
選育高固氮活性豆科植物品種是提高豆科植物固氮能力的一個(gè)有效途徑。豆科植物根瘤菌固氮的最初輸出產(chǎn)物主要是酰脲（尿*素和尿囊酸）。酰脲是豆科植物一根瘤菌共生固氮中的氮代謝產(chǎn)物，是氮素貯藏和運(yùn)輸?shù)闹饕问?，在豆科植物氮代謝中起著重要作用?？赏ㄟ^測定豆科植物組織中酰脲的含量，從而評估其固氮能力。
尿*素在過酸或堿條件下水解產(chǎn)生乙醛酸，然后在*和強(qiáng)酸條件下可被氧化，生成紅色絡(luò)合物，在535 nm處有特殊吸收峰，據(jù)此可由吸光值計(jì)算出樣本中酰脲的含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、鼓風(fēng)烘箱、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、30~50目篩、研缽、冰和蒸餾水、無水乙醇、濃鹽酸和EP管。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)
植物樣本：將供試的植物樣本在65℃的鼓風(fēng)烘箱中烘干，研磨成粉狀，過30~50目篩。按質(zhì)量（g）︰提取液體積（mL）1︰10~20比例（建議稱取0.1 g烘干樣本，依次加入1.0 mL提取液A與1.0 mL提取液B，禁止將提取液A與提取液B混勻待用），漩渦混勻，在80℃水浴鍋中萃取5 min，然后3500 rpm，室溫，離心15 min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至535 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑六與試劑七置于冰水浴中預(yù)冷30 min以上，并置于冰上待用。
3、 標(biāo)準(zhǔn)液的處理：將標(biāo)準(zhǔn)品配制成100 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液后，用蒸餾水稀釋至12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125 nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
4、 操作表：（在1.5mL EP管中操作）
對照管 | 尿囊酸測定管 | 酰脲測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
樣本（µL） | 400 | 400 | 400 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液（µL） | - | - | - | 400 | - |
蒸餾水（µL） | - | - | - | - | 400 |
試劑一 （µL） | 50 | - | 50 | 50 | 50 |
試劑三（µL） | - | 100 | - | - | - |
- | 充分混勻，沸水浴7 min，冷卻至室溫。 | ||||
試劑二（µL） | 50 | - | 50 | 50 | 50 |
- | 充分混勻，100℃水浴加熱6 min，冷卻至室溫 | ||||
試劑四（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑五（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻，室溫下靜置6 min，然后轉(zhuǎn)移至冰水浴中，冷卻至4℃ | |||||
試劑六（µL） | 500 | 500 | 500 | 500 | 500 |
試劑七（µL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻，室溫下靜置15 min | |||||
取1 mL反應(yīng)液，于1 mL玻璃比色皿中測定535 nm處吸光值A，分別記為A對照管、A尿囊酸測定管、A酰脲測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管及A空白管。計(jì)算ΔA尿囊酸=A尿囊酸測定管-A對照管，ΔA酰脲=A酰脲測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。 | |||||
注意：對照管不進(jìn)行水浴加熱處理；尿囊酸測定管只需進(jìn)行第二次的沸水浴；測定管、標(biāo)準(zhǔn)管及空白管在沸水浴加熱時(shí)，EP管蓋緊并用封口膜密封，避免液體蒸發(fā)影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
三、植物中酰脲含量的計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b，將ΔA尿囊酸和ΔA酰脲分別帶入方程得到x1（nmol/mL）和x2（nmol/mL）。
2、 豆科植物中酰脲含量的計(jì)算：
尿囊酸含量（nmol/g 質(zhì)量）= x1×V提取÷W=2×x1÷W
酰脲含量（nmol/g 質(zhì)量）= x2×V提取÷W=2×x2÷W
V提?。杭尤胩崛∫后w積，2.0 mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1、同一批檢測樣本需配1-2個(gè)空白管。
2、當(dāng)OD值高于0.9時(shí)，建議將樣本稀釋后檢測，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、試劑六與試劑七在使用之前請先置于冰上預(yù)冷30 min以上。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、取0.1g馬齒莧，進(jìn)行樣本處理，按照測定步驟操作，測定計(jì)算ΔA酰脲=A酰脲測定管-A對照管=0.559-0.385=0.174，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0708x+0.0059，計(jì)算x2=2.3743，按照計(jì)算公式計(jì)算得：
酰脲含量（nmol/g 質(zhì)量）= x2×V提取÷W=2×x2÷W=2×2.3478÷0.1=47.486 nmol/g 質(zhì)量。
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