儲存條件
-20℃
中文名稱
NAD激酶(NADK)活性檢測試劑盒輔酶
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
NAD Kinase(NADK) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑，詳情見網(wǎng)站說明書

產(chǎn)品型號：BC1030-50T/24S

更新時間：2024-04-24

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1606

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

NAD激酶（NADK）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC1030
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體25 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑四	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑五	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑六	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑七	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑八	液體42 μL×1瓶	2-8℃保存
試劑九	液體50 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑十	液體100 mL×1瓶（自備）	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑三：用時加入3.75mL雙蒸水，充分溶解，可分裝保存，-20℃保存兩周，禁止反復(fù)凍融；臨用前取出一支稀釋100倍使用。
試劑四：用時加入2.5 mL雙蒸水，充分溶解，2-8℃保存；
試劑五：用時每瓶加入3 mL雙蒸水，充分溶解，2-8℃保存；
試劑六：用時加入6 mL雙蒸水，充分溶解，2-8℃保存；
試劑七：用時加入6 mL雙蒸水，充分溶解，2-8℃避光保存；
試劑八：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加入3 mL蒸餾水充分溶解，可分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑十：自備95%乙醇；
標(biāo)準(zhǔn)品：加入1.9 mL蒸餾水，即得2 μmol/mL NADP標(biāo)品。臨用前稀釋100倍得20 nmol/mL NADP標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

產(chǎn)品說明：
NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)能夠催化NAD⁺磷酸化生成NADP⁺的酶，可催化NAD(H)以ATP或無機*[poly(P)]作為磷?；w進行磷酸化反應(yīng)，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。

NADK催化NAD⁺磷酸化，生成NADP⁺；NADP⁺可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH；NADPH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT），通過其在570nm的吸光值大小可反映出NADK活性的大小。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

樣本的處理必須在0℃-4℃中操作完成，以防止酶變性失活。建議在正式實驗前，選取差別較大的兩個樣本進行預(yù)實驗。

2、試劑三、四、五、六、七、八在測定過程中都必須在冰上放置。
3、當(dāng)初始吸光值大于0.6時，建議將樣本用PBS稀釋后測量。
4、若測量樣本數(shù)量過多，可以將試劑二、五、六、七按比例配成工作液使用。
實驗實例：

取0.1大鼠腎臟加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清稀釋2倍后按照測定步驟操作，測得A測定=0.455，A對照=0.213，計算ΔA測定=A測定-A對照=0.455-0.213=0.242，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.1662x-0.0343，計算x=（0.242+0.0343）/0.1662=1.66，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

NADK（U/g 質(zhì)量）=0.067×x÷W×稀釋倍數(shù)=0.067×1.66÷0.1×2=2.22 U/g 質(zhì)量。

取小鼠血漿直接檢測，測得A測定=0.131，A對照=0.094，計算ΔA測定=A測定-A對照=0.131-0.094=0.037，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.1662x-0.0343，計算x=（0.037+0.0343）/0.1662=0.429，按血漿體積計算酶活得：

NADK（U/mL）=0.067×x =0.067×0.429=0.028 U/mL。
參考文獻：

Pollak N, Niere M, Ziegler M. NAD kinase levels control the NADPH concentration in human cells[J]. Journal of Biological Chemistry, 2007, 282(46): 33562-33571.

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