儲存條件
-20℃
中文名稱
γ-谷氨酰半氨酸連接酶試劑盒谷甘肽
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
γ-glutamylcysteine Ligase(GCL) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC1210-50T/24S

更新時間：2024-04-08

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1474

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

γ-谷氨酰半*氨酸連接酶（GCL）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC1210
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	液體45 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二A	液體15mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二B	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑三	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑五	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑六	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑七	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑二B：臨用前加6 mL蒸餾水充分震蕩溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，禁止反復(fù)凍融；
試劑二的配制：臨用前根據(jù)樣本量按試劑二A：試劑二B=1.3mL：0.52mL（共1.82mL，7T）的比例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配，當(dāng)天用完。
試劑三：臨用前加5 mL蒸餾水充分震蕩溶解，2-8℃可以保存4周；
試劑五：臨用前加入10 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑2-8℃保存2周；
試劑六：臨用前加入10 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑2-8℃保存2周；
工作液：臨用前根據(jù)樣本量按試劑五：試劑六：試劑七=0.5mL：0.5mL：0.5mL（共1.5mL，3T）的比例配制，配好的工作液應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，限當(dāng)天使用。（注意：配制工作液最好使用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。）
標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。
0.1μmol/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：臨用前取0.1mL 10 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液和0.9mL蒸餾水混合，配制濃度為1 μmol/mL；再取0.1mL 1 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液和0.9mL蒸餾水混合配制成0.1μmol/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

產(chǎn)品說明：
GCL（glutamate cysteine ligase）是GSH合成的限速酶，GSH對GCL有反饋抑制作用。GCL基因表達受多種因素調(diào)節(jié)，如氧化劑、抗氧化劑、生長因子和炎癥因子等。GCL活性高低對GSH含量和GSH/*比值有重要影響。

在ATP和Mg²⁺存在下，GCL催化*氨酸和半*氨酸合成γ-谷氨酰半*氨酸；同時ATP去磷酸化產(chǎn)生無機磷分子，通過測定無機磷增加速率，即可計算出GCL活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、冷凍離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

樣本處理等過程均需要在冰上進行，且須在當(dāng)日測定酶活力，以免影響其活力。如果是勻漿液，避免反復(fù)凍融。
樣本測定前先取1-2個樣做預(yù)實驗，如吸光值大于1，應(yīng)先用試劑一(或者生理鹽水)稀釋到適當(dāng)倍數(shù)，哺乳動物組織和血液一般稀釋3-5倍。
細(xì)胞中GCL活性測定時，細(xì)胞數(shù)目須在300萬-500萬之間，細(xì)胞中GCL的提取時可加試劑一（或生理鹽水）后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞。
測定吸光值時請于水浴后10-40分鐘內(nèi)測完。

實驗實例：

取0.1g柳樹加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定管-A對照管=0.923-0.635=0.288，ΔA標(biāo)= A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.514-0.002=0.512，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

GCL（U/g 質(zhì)量）=0.0544×ΔA測÷ΔA標(biāo)÷W=0.306 U/g 質(zhì)量。

取0.1g脾臟加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清稀釋5倍，置冰上按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定管-A對照管=0.713-0.285=0.428，ΔA標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.514-0.002=0.512，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

GCL（U/g 質(zhì)量）=0.0544×ΔA測÷ΔA標(biāo)÷W×5（稀釋倍數(shù)）=2.274 U/g 質(zhì)量。
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