多胺氧化酶（PAO）活性檢測試劑盒土壤

產(chǎn)品簡介：

多胺氧化酶（PAO）活性檢測試劑盒土壤
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Polyamine Oxidase （PAO）Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC5220-50T/48S

更新時間：2024-04-19

廠商性質：生產(chǎn)廠家

訪問量：1017

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

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產(chǎn)品介紹

多胺氧化酶（PAO）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5220

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體35mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體3.5mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體3.5mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體3mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

1、工作液：臨用前根據(jù)實驗所需量按照試劑一：試劑二：試劑三=600μL：60μL：60μL（約1T）的比例配制工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：

多胺氧化酶（Polyamine Oxidases，PAO）是催化生物體內多胺氧化的關鍵酶，多胺能夠與核酸、蛋白質、細胞膜分子互作，直接影響細胞的生長、分化和凋亡，而PAO可通過調節(jié)細胞內多胺水平和生成物的濃度，參與各種植物體對逆境脅迫的反應和生長發(fā)育過程。

PAO催化多胺氧化生成H₂O₂，過氧化物酶在有氧存在時催化H₂O₂分解，同時將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質，在500nm處有特征吸收峰，顏色深淺與PAO活性成線性關系

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式低溫離心機、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本的處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1. 組織：按照組織質量（g）︰提取液體積（mL）為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿。于4℃，10000g離心10min，取上清，置于冰上待測。

2. 細胞或細菌：按照細胞或細菌數(shù)量（10⁴個）︰提取液體積（mL）為500~1000︰1的比例（建議500萬細胞或細菌加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞或細菌（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間3min），于4℃，10000g離心10min，取上清，置于冰上待測。

3. 液體：直接測定。若有沉淀，離心后測定。

二、測定步驟

1、可見分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至500nm，蒸餾水調零。

2、測定前將工作液37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱預熱10min以上。

3、操作表：在EP管中分別加入下列試劑：

試劑名稱（μL）	測定管	空白管
工作液	700	700
試劑四	50	50
上清液	250	-
蒸餾水	-	250
充分混勻，于500 nm處測定30s吸光度A1，然后在37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱反應1h，測定1h30s吸光度A2，計算ΔA=A2-A1?？瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。若反應1h后有沉淀，4℃離心后取上清測定。

三、計算公式

1. 按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：在每毫升反應體系中，每毫克蛋白每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

PAO活性（U/mg prot）=ΔA×V反÷（V樣×Cpr）÷T÷0.001×F=66.67×ΔA÷Cpr×F

2. 按照樣本質量計算

酶活單位定義：在每毫升反應體系中，每克組織每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

PAO活性（U/g 質量）=ΔA×V反÷（W÷V提×V樣）÷T÷0.001×F=66.67×ΔA÷W×F

3. 按照細胞數(shù)量計算

酶活單位定義：在每毫升反應體系中，每10⁴ 個細胞或細菌每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

PAO活性（U/10⁴ cell）=ΔA×V反÷（500÷V提×V樣）÷T÷0.001×F=0.133×ΔA×F

4. 按液體體積計算

酶活單位定義：在每毫升反應體系中，每毫升液體樣本每分鐘催化在500nm處吸光值增加0.001定義為一個酶活力單位。

PAO活性（U/mL）=ΔA×V反÷V樣÷T÷0.001×F=66.67×ΔA×F

V反：反應總體積，1.0mL；V樣：加入樣本上清體積，0.25mL；V提：加入提取液的體積，1mL；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；500：細胞或細菌數(shù)量，500萬；T：反應時間，60min；F：稀釋倍數(shù)。

實驗實例：

1. 稱取0.1023g珍珠梅葉片加入1mL提取液進行樣本處理，離心取上清后按測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得A1=0.256，A2=0.637，ΔA=A2-A1=0.381，根據(jù)計算公式得：

PAO活性（U/g 質量）=66.67×ΔA÷W=66.67×0.381÷0.1023=248.302 U/g 質量

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