α-甘露糖苷酶活性檢測試劑盒糖代謝

產(chǎn)品簡介：

α-甘露糖苷酶活性檢測試劑盒糖代謝
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
α-Mannosidase（α-man）Activity Assay kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC5040-50T/24S

更新時間：2024-07-07

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：935

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

α-甘露糖苷酶(α-man)活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5040

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體50 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2支	-20℃保存
試劑三	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	3mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前每支加入1mL 試劑四溶解，溶解后的試劑在-20℃分裝保存，可以保存4周。

2、標(biāo)準(zhǔn)品：5mmol/L的對硝基苯*標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

α-man分布廣泛、種類繁多，在真核生物胞質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體中都有發(fā)現(xiàn)，不同種類、功能的α-man共同參與N-聚糖的修飾過程。

α-man和特定底物發(fā)生反應(yīng)，其生成物在405nm處有特征吸收峰，根據(jù)吸光度的變化率可計算出α-man活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、勻漿器/研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）︰提取液體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后12000 g，4℃，離心10 min，取上清置于冰上待測。

2、細(xì)胞或細(xì)菌：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000︰1的比例（建議500萬個細(xì)胞或細(xì)菌加入1 mL提取液）進(jìn)行提取，冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌（功率200 W，超聲3秒，間隔7秒，總時間3 min）；然后12000 g，4℃，離心10 min，取上清置于冰上待測。

3、液體：直接檢測。若有渾濁可以離心后測定

二、測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至405 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將5mmol/L的對硝基苯*標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.01、0.005mmol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、操作表：(在1.5 mL離心管中)

試劑名稱（µL）	測定管	對照管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
樣本	125	125	-	-
標(biāo)準(zhǔn)溶液	-	-	125	-
試劑一	550	625	625	625
試劑二	75	-	-	-
蒸餾水	-	-	-	125
混勻，37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)10 min
試劑三	250	250	250	250
混勻，測定405 nm處吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管，標(biāo)準(zhǔn)曲線、空白管只需檢測1-2次。

三、α-甘露糖苷酶(α-man)活性計算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y＝kx+b，將ΔA帶入方程得到x（mmol/L，即μmol/mL）。

2、 α-甘露糖苷酶活性的計算：

（1）按蛋白濃度計算

酶活定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯*為1個酶活力單位。

α-甘露糖苷酶酶活（U/mg prot）= x× V樣÷（V樣×Cpr）÷T×F= x×0.1÷ Cpr ×F

（2）按樣本質(zhì)量計算

酶活定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯*為1個酶活力單位。

α-甘露糖苷酶酶活（U/g質(zhì)量）= x× V樣÷（W×V樣÷V提?。?/span>÷T×F= x×0.1÷W×F

（3）按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計算

酶活定義：每10⁴個細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯*為1個酶活力單位。

α-甘露糖苷酶酶活（U/10⁴cell）= x× V樣÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V提取）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）÷T×F
= x×0.1÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個）×F

（4）按液體體積計算

酶活定義：每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯*為1個酶活力單位。

α-甘露糖苷酶酶活（U/mL）＝x×V樣÷V樣÷T×F= x×0.1×F

V提?。禾崛∫后w積，1 mL；V樣：加入的樣本體積，0.125 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，10 min； F：稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1、如果測定吸光值A＞1.5或ΔA＞1，建議稀釋樣本后再測定，計算公式中乘以稀釋倍數(shù)；如果測定吸光值較低或接近空白OD值，建議增加樣本量后再進(jìn)行測定。

實驗實例：

1、稱取0.1 g兔子肝臟組織，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，12000 g，4℃條件下離心10 min；取上清置于冰上待測。使用1mL玻璃比色皿按照測定步驟操作，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.404-0.309=0.095，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.0294x+ 0.0092，計算x=0.0422，按公式計算活性：

α-甘露糖苷酶酶活（U/g 質(zhì)量）= x×0.1÷W×F = 0.0422U/g質(zhì)量

2、稱取0.1 g草莓果肉，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，12000 g，4℃條件下離心10 min；取上清置于冰上待測。使用1mL玻璃比色皿按照測定步驟操作，計算ΔA=A測定管-A對照管=0.113-0.091=0.022，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.0294x+ 0.0092，計算x=0.0063，按公式計算活性：