儲存條件
2-8℃
中文名稱
脂蛋白酯酶（LPL）檢測試劑盒脂肪酸代謝
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Lipoprteinlipase(LPL) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑，詳情見網(wǎng)站說明書

產(chǎn)品型號：BC2440-50T/24S

更新時間：2024-07-09

廠商性質：生產(chǎn)廠家

訪問量：2012

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

花香蝶自來|Solarbio小分子化合物“優(yōu)秀員工展”第14期

ELISA試劑盒操作不當將引起較大的誤差

產(chǎn)品介紹

脂蛋白酯酶（LPL）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2440
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1支	2-8℃保存
試劑三	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
標準品	液體1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑二：臨用前取1支加入1.5 mL丙酮溶解備用，用不完的試劑-20℃保存4周；
標準品：5 μmol/mL對硝基 *酚標準溶液。臨用前取30μL 5μmol/mL標準液，加入450μL試劑一充分混勻，配制成0.3125μmol/mL標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積）。

產(chǎn)品說明：
脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是甘油三酯降解的降速酶，可催化甘油三酯水解為脂肪酸和單酸甘油酯，主要在肝臟實質細胞中合成，在脂質代謝和轉運中發(fā)揮重要作用。
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基*酚，在400nm有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、EP管、冰、丙酮和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣本：直接檢測。
二、測定步驟

分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至400nm，蒸餾水調零。
操作表：在1.5mL EP管中進行下列操作：

樣本名稱	對照管	測定管	標準管	空白管
樣本（μL）	100	100	-	-
標準管（μL）	-	-	100	-
蒸餾水（μL）	-	-	-	100
試劑一（μL）	400	360	400	400
試劑二（μL）	-	40	-	-
混勻，45℃水浴10min			-	-
試劑三（μL）	500	500	500	500
充分混勻放置2min后，對照管和測定管8000g常溫離心10min，取上清、標準管和空白管于1mL玻璃比色皿中測定400nm處吸光值，記為A對照管、A測定管、A空白管、A標準管，ΔA=A測定管- A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。空白管和標準管只需做1-2次。

三、LPL活性計算
1、血清（漿）LPL活力計算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基 *酚為一個酶活力單位。
LPL（U/mL）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準
2、組織、細菌或細胞中LPL活力計算
（1）按樣本質量計算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基*酚為一個酶活力單位。
LPL（U/g 質量）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基*酚為一個酶活力單位。
LPL（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷（V提取×Cpr）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷Cpr
（3）按細菌或細胞數(shù)量計算：
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每10⁴個細胞每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝*酚為一個酶活力單位。
LPL（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷N÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷N
C標準：標準溶液濃度，0.3125μmol/mL；V提?。杭尤朐噭┮惑w積，1mL；T：反應時間，10min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細菌或細胞總數(shù)，以萬計；1000：單位換算系數(shù)，1μmol=1000nmol。
注意事項：

測定管加入試劑二后混變渾濁為正常現(xiàn)象。
若A大于1，將粗酶液用試劑一稀釋后再進行測定。

實驗實例：

取0.1g大鼠肌肉加入1mL試劑一，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管- A對照管=0.697-0.160=0.537，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按樣本質量計算酶活得：LPL（U/g 質量）= 31.25×ΔA÷ΔA標準÷W=31.25×0.537÷0.544÷0.1=308.48 U/g 質量。
取兔血清稀釋2倍后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A測定管- A對照管=0.639-0.096=0.543，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按血清（漿）體積計算酶活得：LPL（U/mL）= 31.25×ΔA÷ΔA標準×2（稀釋倍數(shù)）=31.25×0.543÷0.544×2（稀釋倍數(shù)）=62.39 U/mL。