β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產(chǎn)品說明：
(β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時 SA-β-Gal (senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細(xì)胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。β-半乳糖苷酶試劑盒以 X-Gal 為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍(lán)色產(chǎn)物，光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細(xì)胞，對衰老前的細(xì)胞(presenescent cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent cells)、永生細(xì)胞(immortal cells)或腫瘤細(xì)胞等不會染色。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定，對于普通的切片也少足夠檢測 100 個樣品，使用 6 孔板測定，足夠測定 100 個樣品。

自備材料：
PBS 或 HBSS 、細(xì)胞培養(yǎng)器皿 、顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：
(一) 貼壁細(xì)胞染色：
1、 對于 6 孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次，加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定 15min。對于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。
2、 吸除細(xì)胞固定液，用 PBS 或 HBSS 洗滌細(xì)胞 3 次，每次 3min。
3、 吸除 PBS 或 HBSS，每孔加入 1ml 染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。

染色工作液的配制方法參考表 1。
表 1：染色工作液的配制方法:
β-半乳糖苷酶染色液 A 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 B 10μl
β-半乳糖苷酶染色液 C 930μl
X-Gal 溶液 50μl

說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴(yán)重變形。
4、 37℃孵育過夜，可以用 parafilm 或保鮮膜封住 6 孔板防止蒸發(fā)。
注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。
5、 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù)，可以去除染色工作液，加入 2ml PBS，4℃可以保存數(shù)天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。
(二) 懸浮細(xì)胞染色：
1、 離心收集細(xì)胞 1.5ml 離心管內(nèi)，用 PBS 或 HBSS 洗滌 1 次，加入 1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。
2、 離心，吸除細(xì)胞固定液，用 PBS 或 HBSS 洗滌細(xì)胞 3 次，每次 3min。
3、 離心，吸除 PBS 或 HBSS，每管加入 0.5-1ml 染色工作液。
染色工作液的配制方法參考表 1。
4、 37℃孵育過夜。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。
5、 取部分染色后的細(xì)胞，滴加到載玻片上或 6 孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數(shù)，可以離心，去除染色工作液，然后加入 1ml PBS，4℃可以保存數(shù)天。如果離心，取細(xì)胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。
(三) 組織切片染色：
1、 對于石蠟切片先按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進(jìn)行。
2、 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于 15min。
3、 用 PBS 浸泡洗滌組織 3 次，每次不少于 5min。
4、 吸除 PBS，加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表 1。
5、37℃孵育過夜，可以用 parafilm 或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。把整個切片浸泡在染色工作液中。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。
5、 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后 4℃可以保存較長時間。

注意事項(xiàng)：
1、 β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意防護(hù)。
2、 β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的 pH 條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。用于細(xì)胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的 pH 值，而導(dǎo)致染色失敗。
3、 β-半乳糖苷酶染色液 B 在剛剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀，屬正?，F(xiàn)象，充分混勻或 Vortex 后，沉淀會全部溶解。作為常規(guī)，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。
4、 配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色時可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進(jìn)行，例如普通的 6 孔板就可以用作染色的容器。
5、 需自備 PBS 或 HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
6、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Exosomes from hyperglycemia-stimulated vascular endothelial cells contain versican that regulate calcification/senescence in vascular smooth muscle cells》 作者:Shuang Li, Jun-Kun Zhan, Yan-Jiao Wang, Xiao Lin, Jia-Yu Zhong, Yi Wang, Pan Tan, Jie-Yu He, Xing-Jun Cui, Yi-Yin Chen, Wu Huang and You-Shuo Liu 期刊:Cell & Bioscience 影響因子:3.355 PMID:30622695

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